Molekularne techniki analizy RNA

-15%

Molekularne techniki analizy RNA

Ćwiczenia

1 opinia

Praca zbiorowa

Format:

pdf, ibuk

DODAJ DO ABONAMENTU

WYBIERZ RODZAJ DOSTĘPU

8,50  10,00

Format: pdf

 

Dostęp online przez myIBUK

WYBIERZ DŁUGOŚĆ DOSTĘPU

6,15

Wypożycz na 24h i opłać sms-em

8,5010,00

cena zawiera podatek VAT

ZAPŁAĆ SMS-EM

TA KSIĄŻKA JEST W ABONAMENCIE

Już od 19,90 zł miesięcznie za 5 ebooków!

WYBIERZ SWÓJ ABONAMENT

Prezentowane w publikacji techniki są obecnie stosowane w większości laboratoriów zajmujących się biologią molekularną, ale ciągle brak ich opisu w literaturze polskojęzycznej. Wykłady do fakultetu „Molekularne techniki analizy RNA” obejmują aktualny stan wiedzy na temat metabolizmu RNA u eukariontów oraz teorię technik pozwalających na badanie poziomu RNA w komórce, nowo syntetyzowanego transkryptu oraz badania oddziaływań białek uczestniczących w transkrypcji.


Na ćwiczeniach praktycznych studenci poznają wybrane techniki badania RNA na przykładzie organizmów modelowych: drożdży Saccharomyces cerevisiae oraz rzodkiewnika Arabidopsis thaliana.


Prezentacja metod jest ilustrowana odpowiednimi przykładami, w których studenci samodzielnie badają poszczególne rodzaje RNA, jak utajnione, niestabilne transkrypty CUT czy microRNA, i etapy ich metabolizmu. Skrypt ten zawiera zarówno wprowadzenie teoretyczne odwołujące się do najnowszych pozycji literaturowych, jak i opis wykonania poszczególnych eksperymentów.


Skrypt adresowany do osób zainteresowanych metabolizmem RNA oraz nowoczesnymi, molekularnymi technikami jego badania – studentów wszystkich kierunków Wydziału Biologii i Międzywydziałowych Indywidualnych Studiów Matematyczno-Przyrodniczych Uniwersytetu Warszawskiego.


Liczba stron64
WydawcaUniwersytet Warszawski
ISBN-13978-83-235-1755-9
Numer wydania1
Język publikacjipolski
Informacja o sprzedawcyRavelo Sp. z o.o.

INNE EBOOKI AUTORA

EBOOKI WYDAWCY

Ciekawe propozycje

Spis treści

  Wstęp    7
  1. Analiza northern – detekcja RNA na filtrach. Wykrywanie prekursorów rRNA u drożdży    9
    Opis i cel doświadczenia    9
  ĆWICZENIE 1. Izolacja całkowitego RNA z różnych organizmów oraz ocena jakościowa uzyskanego preparatu    10
  Metody izolacji RNA    10
  RNazy    10
  Dobra praktyka laboratoryjna    11
  Inhibitory RNaz    11
  Przechowywanie RNA    12
  Ocena jakości RNA    12
  Izolacja całkowitego RNA z komórek drożdżowych    13
  Literatura    14
  ĆWICZENIE 2. Elektroforetyczny rozdział RNA w żelu agarozowym i ocena jakości RNA    15
  Technika northern    15
  Znakowanie izotopowe    15
  Znakowanie nieizotopowe    15
  Detekcja znaczników nieradioaktywnych    16
  Elektroforeza RNA z drożdży w żelu agarozowym w warunkach denaturujących    16
  Transfer kapilarny    17
  ĆWICZENIE 3. Wykrywanie prekursorów rRNA u drożdży – hybrydyzacja    18
  Skład buforów    18
  Procedura hybrydyzacji    18
  Odpłukanie nadmiaru sond    18
  Wizualizacja hybrydyzacji    18
  Literatura    18
  2. Analiza northern – wykrywanie transkryptów CUT u drożdży    20
    Wstęp    20
  Co to są CUTy?    20
  Funkcje CUTów    21
  Literatura    21
  ĆWICZENIE 4. Elektroforeza RNA w denaturującym żelu poliakrylamidowym    23
  Elektroforeza RNA w 6% żelu poliakrylamidowym z 7 M mocznikiem    23
  Transfer elektryczny mokry    23
  ĆWICZENIE 5. Hybrydyzacja RNA na membranie z sondą radioaktywną specyficzną wobec IGS1-R, wyznakowaną metodą „random-priming”    24
  3. Wykrywanie małych RNA    25
    Wstęp    25
  Małe interferujące RNA: miRNA i siRNA    25
  Wybrane metody detekcji małych RNA (iRNA)    26
  Literatura    28
  ĆWICZENIE 4. Pulsacyjny RT-PCR, cz. 1 – pulsacyjna odwrotna transkrypcja    29
  Materiały    29
  Trawienie DNazą    29
  Pulsacyjna odwrotna transkrypcja    29
  ĆWICZENIE 5. Reakcja PCR – cz. 2    31
  ĆWICZENIE 6. Rozdział w żelu agarozowym produktów pulsacyjnego RT-PCR    32
  Przygotowanie próbek    32
  4. Badanie końców cząsteczek RNA na przykładzie drożdżowych prekursorów snoRNA. Technika cRT-PCR    33
    Wstęp    33
  RNaza H    33
  Ligacja RNA    34
  Literatura    34
  ĆWICZENIE 6. Trawienie RNazą H i ligacja RNA    35
  Trawienie RNazą H    35
  Ligacja RNA    36
  ĆWICZENIE 7. Reakcja odwrotnej transkrypcji i PCR    37
  Reakcja odwrotnej transkrypcji    37
  PCR    37
  ĆWICZENIE 8. Elektroforeza produktów PCR    38
  5. PCR ilościowy: RT-qPCR    39
    Wstęp    39
  Formaty detekcji produktów qPCR    39
  Kontrola jakości RNA    40
  Analiza doświadczeń qPCR    40
  Najbardziej kluczowe elementy RT-qPCR    41
  Literatura    42
  ĆWICZENIE 8. Projektowanie starterów do qPCR – konkurs na najlepszą parę starterów    43
  Wskazówki do projektowania starterów    43
  Wykonanie ćwiczenia    44
  ĆWICZENIE 9. Testowanie zaprojektowanych starterów do qPCR    45
  Przygotowanie starterów    45
  Przygotowanie reakcji qPCR    45
  ĆWICZENIE 10. Analiza reakcji qPCR    46
  6. Oznaczenia aktywności enzymów biorących udział w obróbce RNA    47
  Oznaczanie aktywności enzymów hydrolizy kapu    47
  Struktura kapu transkryptów polimerazy RNA II    47
  Hydroliza kapu    48
  Badanie enzymatycznej hydrolizy kapu    49
  Oznaczanie aktywności endonukleazy Rnt1    50
  Endonukleazy z rodziny RNazy III    50
  Rnt1    51
  Biogeneza sn/snoRNA u drożdży Saccharomyces cerevisiae, rola Rnt1    52
  Literatura    53
  ĆWICZENIE 11. Analiza aktywności Rnt1 w ekstrakcie drożdżowym    55
  Protokół    55
  7. Analiza oddziaływania białka z kwasem nukleinowym: test opóźnienia migracji w żelu (EMSA)    58
    Wstęp    58
  Analiza EMSA    58
    Terminacja transkrypcji polimerazy RNA I    59
  Literatura    60
  ĆWICZENIE 12. Wiązanie Reb1 do IGS1 rDNA in vitro    61
  Badane warianty IGS1 rDNA S. cerevisiae    61
  Wiązanie białka do DNA    61
  Rozdział w natywnym żelu poliakrylamidowym    61
  8. Sztuczne microRNA – amiRNA    63
    Wstęp    63
  Wybrane zalety amiRNA    64
  Wady amiRNA    64
  Literatura    64
  ĆWICZENIE 13. Projektowanie amiRNA    64
RozwińZwiń
W celu zapewnienia wysokiej jakości świadczonych przez nas usług, nasz portal internetowy wykorzystuje informacje przechowywane w przeglądarce internetowej w formie tzw. „cookies”. Poruszając się po naszej stronie internetowej wyrażasz zgodę na wykorzystywanie przez nas „cookies”. Informacje o przechowywaniu „cookies”, warunkach ich przechowywania i uzyskiwania dostępu do nich znajdują się w Regulaminie.

Nie pokazuj więcej tego powiadomienia